腺病毒介导干扰RNA对荷人骨肉瘤裸鼠VEGF表达的影响

摘要

目的:探讨AD-VEGF-siRNA对荷人骨肉瘤裸鼠瘤体组织以及血液中VEGF表达的影响.方法:应用VEGF高表达人骨肉瘤细胞系MG-63制备荷骨肉瘤裸鼠模型;成瘤组动物随机分为3组,AD-VEGF-siRNA组15只:AD-EGFP组15只;PBS组15只.另留取3只裸小鼠,未接种肿瘤细胞,未注射药物.成瘤裸鼠瘤体内分别注射上述各组药物,隔天1次,200μl/次,共5次,病毒总量2×109PFU.接种后第11天、14天、17天实验各组分别处死3只裸小鼠.用ELISA法栓测各组荷瘤小鼠血液和瘤体组织中VEGF蛋白表达情况.试验结束(第19天)处死剩余裸小鼠.用RT-PCR及免疫组化技术检测裸小鼠瘤体组织VEGF的表达,用EUSA法检测各组荷瘤小鼠血液和瘤体组织中VEGF蛋白的表达.结果:1)各组裸小鼠约在接种5天成瘤;2)用AD-VEGF-siRNA处理后,RT-PCR检测发现裸小鼠瘤体组织的VEGF mRNA表达水平明显低于两对照组(P＜0.05);3)免疫组化检测发现AD-VEGF-siRNA组VEGF蛋白表达明显减少;4)ELISA检测发现成瘤组小鼠血清VEGF蛋白水平明显高于未作任何处理的健康裸小鼠组(P＜0.05),在各时间段AD-VEGF-siRNA组血液及瘤体组织中VEGF蛋白的表达水平明显低于两对照组(P＜0.05).结论:AD-VEGF-siRNA在体内可以抑制荷骨肉瘤裸小鼠瘤体VEGF基因的表达及血液中VEGF的水平;应用siRNA腺病毒表达载体技术为骨肉瘤抗血管生成的治疗提供了借鉴.