靶向人肝癌VEGF-siRNA表达载体对裸鼠HepG-2移植瘤生长以及VEGF和MMP-9表达的影响

摘要

目的：肝癌细胞的侵袭和转移是肝癌治疗失败和患者致死的主要原因。近年来研究表明原发肿瘤组织及转移组织周围的微环境中的各种分子开关机制(如生长因子、细胞因子、蛋白水解酶系统等)失调，是肿瘤发生侵袭、转移的内在因素，其中以血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋酶-9(MMP-9)为代表的促进微血管生成的因子及蛋白水解酶系统起着重要作用。本研究试图通过建立裸鼠HepG-2移植瘤模型，研究靶向人肝癌VEGF-siRNA表达载体对其生长以及VEGF和MMP-9表达的影响。 方法：构建裸鼠HepG-2移植瘤模型。构建成功后，将24只荷瘤裸鼠被随机分为3组：第1组为实验组(pSUPER.retro.neo-VEGF-siRNA载体组)，第2组为阴性对照组(pSuper.retro.neo空载体组)，第3组为空白对照组(生理盐水组)，每组8只。分别于移植瘤局部注射200ul相应试剂，每7天一次，共四次。每次注射前以及处死荷瘤裸鼠时，测量并记录移植瘤体积。免疫组化SP法检测各组裸鼠移植瘤组织中VEGF及MMP-9蛋白的表达水平并对两者进行相关性分析。 结果：裸鼠HepG-2移植瘤模型成功建立。干预实验过程中，第一天三组瘤体大小差异无显著性(P>0.05)，第8d、15d、22d、29d四个时限点，实验组肿瘤体积均小于阴性对照组及空白对照组，差异有显著性(P<0.05)，而阴性对照组肿瘤体积与空白对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。实验组裸鼠肿瘤体积增长速度较其它两组低，增长曲线平缓。实验组裸鼠移植瘤组织中VEGF及MMP-9蛋白表达的阳性细胞率分别为26.39±3.42(％)、26.87±3.59(％)；阴性对照组裸鼠移植瘤组织中VEGF及MMP-9蛋白表达的阳性细胞率分别为58.09±5.13(％)、61.03±5.31(％)；空白对照组裸鼠移植瘤组织中VEGF及MMP-9蛋白表达的阳性细胞率分别为60.15±5.38(％)、63.10±5.27(％)。实验组较阴性对照组及空白对照组裸鼠移植瘤组织中VEGF及MMP-9蛋白表达的阳性细胞率低，差异具有统计学意义(P<0.05)，而阴性对照组与空白对照组比较，差异不具有统计学意义(P>0.05)，裸鼠移植瘤中VEGF及MMP-9蛋白表达呈正相关(rs=0.905，P<0.05)，有统计学意义。 结论：1.靶向人肝癌VEGF-siRNA表达载体局部注射能够显著抑制裸鼠HepG-2移植瘤生长并下调VEGF及MMP-9表达。 2.裸鼠HepG-2移植瘤模型中VEGF及MMP-9表达正相关。