HBV P区聚合酶基因变异株的检测及限制性内切酶分析

摘要

目的建立HBV聚合酶基因变异株DNA检测技术,探讨变异株的变异规律及其临床意义.方法采用限制性内切酶酶切位点引入法设计引物检测YIDD、YVDD,内切酶分析,PAGE电泳法检测DMHD、LMLL、LMAQ基因变异.结果应用SSP Ⅰ及ApaL内切酶可准确地检测出YIDD和YVDD.23例HBV DNA阳性病例中,9例YMDD未变异,BstN Ⅰ切点保持着野生型序列与参考序列相同;6例YMDD未变异,BstN Ⅰ切点发生变异;2例YMDD未变异,LMLL变异、BstN Ⅰ切点消失,并伴随有YAAV 4个氧基酸发生变异;1例YMDD未变异,DMHD发生变异;2例YIDD变异株伴随LMAQ变异、BstN Ⅰ切点变异;另1例YIDD变异株在502位544位伴随YQHG、YKHG和SNLY、SHLY变异;3例YIDD和2例YVDD病例的BstN Ⅰ切点均有变异.结论研究结果发现,在YMDD未变异株中50%(9/18)为野生株,50%(9/18)有基因变异,提示LMAQ、YIDD、YVDD变异(W2～W12)可能与拉米呋啶药物治疗有关.