NADH-细胞色素b5还原酶突变型蛋白的结构与功能研究

摘要

目的 探讨NADH-细胞色素b5还原酶基因突变引起遗传性高铁血红蛋白血症的分子病理机制,研究突变型(b5R)蛋白结构和功能的关系.方法 用基因重组技术将野生型和突变型(L72P)b5R cDNA克隆于pGEX-2T载体,在大肠杆茵BL21中诱导表达.Western印迹鉴定表达的蛋白为GST-b5R融合蛋白.应用谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析,还原型谷胱甘肽洗脱得到纯化的GST-b5R和GST-b5R L72P融合蛋白,比较GST-b5R和GST-b5R L72P酶活性.结果 突变型酶活性低,为野生型的3%.结论 L72P突变可引起蛋白质二级结构改变从而导致酶的活性下降.