循环肿瘤细胞的磁分离法建立及在肺癌EGFR-TKI治疗中的应用

摘要

目的 探索磁分离循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)联合竞争性等位基因特异性TaqMan(R) PCR (CastPCR)检测表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的可行性.方法 收集12例晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血液样本各7.5 mL,两步法磁分离CTCs,免疫荧光染色检测上皮细胞黏附分子(EpCAM)和细胞角蛋白(Cytokeratin)后,流式细胞术检测CTCs数量及纯度;CastPCR检测CTCs及循环DNA中EGFR基因delEGFR19、T790M和L858R突变;用EGFR基因突变检测试剂盒(ADx-ARMS法)检测癌组织的上述位点突变.结果 高表达与不表达EpCAM的CTCs分别在6例和12例NSCLC患者中被检测出;delEGFR19、T790M和L858R突变例数分别在2例、8例和5例NSCLC患者的CTCs中被检测出,其总检出率为83.3％ (10/12);2例患者的循环DNA中检出L858R突变;ADx-ARMS法检测12例NSCLC患者癌组织中上述3种突变分别是2例、5例和3例,总检出率为75.0％(9/12).CTCs与癌组织的突变具有一致性(Kappa=0.75,P=0.007),循环DNA与癌组织的突变一致性无统计意义(Kappa=0.06,P=0.546).结论 磁分离CTCs联合CastPCR能有效检测EGFR基因突变,值得在NSCLC患者的EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗中推广应用.