二氢叶酸还原酶抑制剂的高效毛细管电泳法筛选模型的建立与应用

摘要

建立了一种采用毛细管电泳法(CE)测定二氢叶酸还原酶(DHFR)反应动力学参数的新方法.以含0.002%Brij-35的50 mmol/L的硼砂缓冲溶液(pH 9.18)作为电泳介质,检测波长280 nm,于19 min内实现了体系中各组分的基线分离.根据酶反应过程中反应物和反应产物的浓度变化计算有关反应动力学参数.将已知的氨甲喋呤、甲氧苄胺嘧啶和叶酸3种抑制剂作用于所建立的二氢叶酸还原酶体系,测得抑制剂的半数抑制浓度与文献值相接近,证明本体系可用于二氢叶酸还原酶抑制剂(DHFRI)的筛选.