醛糖还原酶抑制剂筛选模型的建立和初步应用

摘要

本研究从牛晶状体中提取醛糖还原酶(AR),以DL-甘油醛为底物、还原型辅酶II(NADPH)为辅酶,应用96孔石英板建立了醛糖还原酶抑制剂(ARI)微量高效筛选模型.酶促反应体系体积为200μ1,其组成成分为:50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH6.2)、400mmol/L硫酸锂、5mmol/L 2-巯基乙醇、0.24mmol/L NADPH、1.2mg粗酶、2mmol/L DL-甘油醛,用蒸馏水补足体积.反应温度为37℃,规定反应体系吸光度每分钟下降0.001为一个酶活力单位.以不含底物的样品为空白对照.开展了从微生物代谢产物中筛选ARI的工作,已经累计筛选真菌和稀有放线菌发酵样品约1500个,其中获得阳性样品6个,阳性率约为0.4%.