流感病毒抑制剂筛选模型的建立与应用

摘要

流感病毒以其极快的传播速度和高发病率对人类健康构成了严重威胁.现有的临床抗流感药物主要针对病毒的M2离子通道和神经氨酸酶,其突变发生率较高,容易产生耐药性,亟需发现新的抗流感病毒化合物.本研究利用细胞病变观察和荧光素酶报告系统相结合的方法,建立了流感病毒抑制剂筛选模型.首先根据流感病毒感染MDCK细胞后会使其出现细胞病变(CPE)的现象,对10080份发酵液进行初步筛选,得到了342个阳性样品.在此基础上，通过构建能够稳定表达流感病毒RNA聚合酶依赖的分泌型荧光素酶报告系统的细胞系对化合物进行了复筛。该细胞系在被流感病毒感染后，流感聚合酶将特异启动胞内分泌型荧光素酶的表达，通过检测该酶的表达即可监测流感病毒的复制。利用此模型复筛得到105个对流感病毒抑制率大于70%的阳性化合物。上述两种方法的结合有效提高流感病毒抑制剂筛选的准确性，其中复筛模型省时简便，灵敏度高，为抗流感病毒药物高通量筛选奠定了基础。