D-阿洛酮糖3-差向异构酶重组枯草芽孢杆菌构建及固定化应用

摘要

D-阿洛酮糖3-差向异构酶(D-allulose-3-epimerase)是异构化D-果糖生成D-阿洛酮糖(D-allulose)的关键酶.为提高D-阿洛酮糖3-差向异构酶的热稳定性并获得可重复使用的D-阿洛酮糖3-差向异构酶重组枯草芽孢杆菌固定化细胞,N端融合双亲短肽,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,异源D-阿洛酮糖3-差向异构酶在枯草芽孢杆菌中正确折叠,蛋白大小为33 kDa.40°C孵育48 h,SAP1-DSDPEase残余酶活仍保持在58％.固定化细胞最优条件为海藻酸钠浓度2％、二氧化钛添加量1∶4(二氧化钛∶海藻酸钠)、氯化钙溶液浓度2％、戊二醛0.02％作为交联剂.该条件下固定化细胞酶活回收率高达82％,固定化细胞与游离细胞相比,最适反应温度不变均为80°C,热稳定性提高,连续10次操作使用,酶活回收率仍保留58％,机械强度仍保持100％,转化率仍保持在28.8％,残余酶活保持在70.5％.在海藻酸钠溶液中加入二氧化钛可减少固定化细胞的细胞泄露,增大了机械强度.