新的端粒酶活性抑制蛋白LPTS-L的制备

摘要

LPTS基因是利用定位候选克隆策略克隆的一个新的肝相关候选肿瘤抑制基因.LPTS基因编码一个全长为328氨基酸的蛋白质(LPTS-L),该蛋白具有抑制细胞端粒酶活性的功能.为了进一步研究LPTS-L蛋白的结构与功能,利用DNA重组技术,将LPTS-L的cDNA克隆到表达载体pET-24a中构建重组克隆pET-24-LPTS,并在大肠杆菌BL-21中进行融合表达,获得可溶形式的LPTS-L融合蛋白.采用Ni Sepharose 4B柱亲和层析,可以获得纯度较高的蛋白,但不适合大量制备.通过设计引物去掉了pET-24a载体上的6×His tag将LPTS-L基因进行了非融合表达,然后采用磷酸纤维素P11阳离子交换层析纯化LPTS-L蛋白,纯度可达到55%.再经Sephadex G-100凝胶过滤,LPTS-L蛋白的纯度可达到80%.Western blot实验显示经纯化后的LPTS-L蛋白可与兔抗GST-LPTS-L的多抗发生特异性结合.采用TRAP法测定蛋白质活性,结果显示纯化得到的LPTS-L蛋白可抑制端粒酶的活性,与采用Ni Sepharose 4B纯化获得的LPTS-L融合蛋白比较,其抑制效率基本一致.因此,所建立的技术可以有效地制备LPTS-L蛋白.