胎儿胰岛样细胞团源上皮样细胞分离、纯化和鉴定

摘要

旨在优化胰腺干细胞分离、鉴定的方法和体系,为糖尿病研究和治疗提供种子细胞.采用胶原酶消化法,分离培养出胰岛样细胞团(ICCs),对其进行贴壁培养,从中纯化出上皮样细胞.采用MTT法测定其生长情况并绘制生长曲线.采用免疫组织化学染色检测分离得到细胞的PDX-1、PCNA、CK-7、CK-19、Nestin、Glut2、Vimentin、Insulin表达情况.应用流式细胞仪检测其表面标志.由分离培养的ICCs成功纯化出上皮样细胞;传40代,每代冻存106～108个细胞;生长曲线显示其传代第3天进入对数生长期,第5天进入平台期;免疫组织化学染色显示其表达PDX-1、PCNA、CK-7、CK-19、Nestin、Glut2、Vimentin;不表达Insulin;流式细胞仪分析表明其表达CD29、CD44、CD166,不表达CD11a、CD14、CD34、CD45、CD90、CD105、CD117.由胎儿胰腺能分离出具有自我更新能力的上皮样细胞,为导管来源,具干细胞特性.