抗克伦特罗单链抗体表达载体的构建与鉴定

摘要

为构建克伦特罗(Clenbuterol,CBL)单链抗体(scFv)表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达.以pCANTAB5E-CBL质粒为模板,扩增CBL的scFv基因,与pPICZoA载体重组.然后以重组质粒pPICZαA-scFv为模板扩增scFv及其相连的6个组氨酸(6xHis)片段,再与载体pBV220连接,转化大肠杆菌DH5α,阳性克隆质粒经酶切和PCR鉴定后进行目的片段的序列测定.重组菌经温度诱导表达重组单链抗体,并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定.采用竞争ELISA检测重组单链抗体的抗原结合活性.结果表明重组质粒pBV220-scFv含有插入片段,与原序列的同源性迭99.8%.重组蛋白的分子量接近37 KD,能够被抗His标签单克隆抗体特异性识别且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为4.55 ng/mL.这说明我们成功构建了重组质粒pBV220-scFv并实现了其在大肠杆菌中的表达,为进一步进行CBL免疫法快速检测奠定了一定的基础.