重叠延伸PCR法克隆人脂联素基因及其在毕赤酵母中表达

摘要

利用重叠延伸PCR法克隆出人脂联素基因,连接至克隆栽体pGEM-T中,转化大肠杆菌DH5α,通过测序对其进行序列分析后,进一步构建毕赤酵母表达载体pPIC3.5K-ADPN,通过电击法转化毕赤酵母GS115,转化的重组酵母茵用甲醇诱导外源基因表达.经PCR、Southern blotting鉴定,获得了重组毕赤酵母茵株;经甲醇诱导人脂联素基因表达,Western blotting杂交鉴定证明人脂联素基因已经在毕赤酵母中成功表达.结果表明重叠延伸PCR法准确方便克隆出人脂联素基因,在30℃,1%甲醇诱导48 h,人脂联素基因在巴斯德毕赤酵母中的表达最佳.