快速检测NDM-1基因的环介导恒温扩增技术的建立与评价

摘要

基于DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),探索建立一种应用于NDM-1基因(New Metallo-β-Lactamase-1 Gene,NDM-1)的快速检测方法,以适应临床实验室等的检测需求.利用LAMP技术,以NDM -1基因为靶序列,设计4组LAMP引物,并筛选最优引物组,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性实验.结果表明整个检测过程仅需1h,即可通过肉眼直接目测实验结果.在灵敏度试验中,NDM-1基因的最低检测限为6拷贝/反应.在特异性实验中,以4株病原菌(肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌)以及肠道菌群元基因组DNA、土壤菌群元基因组DNA为模板对NDM-1基因进行检测,结果显示均没有发生非特异性扩增反应.文中建立的LAMP检测方法能够快速检测NDM-1基因,且可直接观察到实验结果,实现了检测结果的可视化.具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求,具有良好的应用价值.