利用家蚕杆状病毒表达家蚕肌质网型钙离子ATP酶蛋白

摘要

肌质网型钙离子ATP酶(Sacro/endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase,Serca)负责将细胞中多余的Ca2+转运并存储于内质网中,从而维持细胞内适宜的Ca2+环境.家蚕Serca创造的细胞内及细胞外Ca2+平衡对家蚕正常生命活动的维持具有重要作用.由于Serca分子量较大并具有10次跨膜结构,很难在大肠杆菌表达系统中表达.为了获得具有生物学活性的重组Serca蛋白,利用pFastBac Dual载体构建了用于表达egfp和serca的双元杆状病毒表达载体,转染细胞后获得重组病毒,将重组病毒感染细胞后,成功地在细胞中表达了EGFP和Serca.通过荧光观察及Western blotting分析表明,感染后细胞中Serca和EGFP表达模式一致,从感染后48 h开始表达,在感染后96 h表达量最大.对获得的重组蛋白进行酶活分析,发现感染后48 h至120 h的细胞Serca酶活显著提高.表明具有生物学活性的Serca在此系统中成功获得表达,为深入研究Serca蛋白的功能奠定了基础.