拟南芥硫酯酶基因在毕赤酵母中的表达

摘要

硫酯酶在生物体内能催化水解脂酰酰基载体蛋白和饱和脂肪脂酰链,对中链脂肪酸(Medium chainfatty acids,MCFAs)的积累起着关键作用.为获得具有生产中链脂肪酸能力的工程菌,以拟南芥cDNA为模板,PCR扩增得到其脂酰-ACP硫酯酶基因AtFatA,经EcoR Ⅰ/XbaⅠ双酶切后连接至同样双酶切的质粒中,获得重组质粒pPICZαA-AtFat.将重组质粒电击转入毕赤酵母GSl15中,通过Zeocin抗性筛选,挑选出阳性克隆子并摇瓶发酵诱导,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得明显目的蛋白条带,首次成功构建AtFatA的真菌表达系统.气质联用法检测发酵产物胞外游离脂肪酸,发现毕赤酵母AtFatA重组菌株比起始GSll5菌株胞外游离MCFAs(主要是辛酸)产量增加51％,MCFAs产量占胞外总脂肪酸产量的28.7％,而野生菌中这一比例仅有18.1％,这为日后生产安全无毒害的MCFAs探索了一条新的途径.