固定化天冬氨酸酶制备(R)3氨基丁酸

摘要

从芽孢杆菌Bacillus sp.YM551基因组中克隆得到天冬氨酸酶基因,以pET 28a(+)为载体构建天冬氨酸酶基因的表达载体pET 28a(+)Asp,将天冬氨酸酶基因进行定点突变,在E.coli BL21(DE3)系统中实现了天冬氨酸酶的异源表达.利用重组的天冬氨酸酶,以氨水、(NH4)2 SO4为辅料,将底物巴豆酸转化为(R)3氨基丁酸.将天冬氨酸酶的工程菌制备成固定化细胞,通过反应条件的优化研究,提高底物的转化率.结果 表明:天冬氨酸酶最适pH为9.0,最适反应温度为40℃.在此反应条件下,加入30 g/L固定化细胞,转化22 h,(R)3氨基丁酸质量浓度达到220 g/L,对映体过量值e.e.s≥99.95％,底物转化率达到98％,固定化细胞重复使用次数不低于24次.