长角血蜱保护性抗原基因P27/30的克隆和原核表达

摘要

采用RT-PCR技术首次从孤雌生殖长角血蜱四川株克隆到P27/30基因,扩增序列全长670 bp,包含完整的开放阅读框,编码201个氨基酸,预测蛋白相对分子质量为23.38 ku.同源性分析表明孤雌牛殖长角血蜱中国株与日本株P27/30基凶同源性高达99.85%.经RT-PCR检测分析,该基因在孤雌生殖长角血蜱的卵、幼蜱、若蜱、饥饿成蜱和饱血成蜱这儿个阶段均有表达.将该基凶亚克隆后连接到pET32a(+)原核表达载体,转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导可成功进行表达.表达的目的蛋白大小为24 ku左右,与预期大小一致;Western-blot显示兔抗长角血蜱伞虫抗体能够识别该重组表达蛋白.