日本血吸虫钙网织蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达及其活化树突细胞的初步分析

摘要

为获得在Sf9昆虫细胞中表达的日本血吸虫钙网织蛋白(Schistosoma japonicum calreticulin protein,SjCRT)并分析其活化小鼠骨髓来源树突状细胞的功能,将构建的重组杆状病毒转移载体pFastBacHTA-SjCRT转入DH 10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-SjCRT,再转染到Sf9昆虫细胞,进行重组蛋白的表达.用Westem blot和间接免疫荧光对表达蛋白进行鉴定.His柱亲和层析法纯化表达的蛋白,Westen blot鉴定纯化后的蛋白.从BALB/c小鼠产生骨髓来源的树突细胞mDCs,用纯化的重组SjCRT蛋白与mDCs共培养,流式细胞术检测mDCs细胞的表面分子MHCⅡ、CD40和CD86的表达.结果显示,在Sf9昆虫细胞中成功表达了SjCRT蛋白；纯化后的重组SjCRT蛋白既能被感染日本血吸虫42 d的兔阳性血清识别,也能被原核表达的重组SJC RT蛋白免疫鼠的血清所识别.流式细胞术结果显示,与对照组的相比,SjCRT蛋白刺激组mDCs细胞表面分子MHCⅡ和CD86的表达量显著增强(P＜0.05).可见,在Sf9昆虫细胞中表达的SjCRT蛋白能刺激小鼠骨髓来源树突细胞表型的成熟.