柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶真核表达质粒的构建及其在DF-1细胞中的表达

摘要

为了构建柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Eimeria tenella serine/threonine protein kinase,EtSTK)基因的真核表达重组质粒,并实现在DF-1细胞中的表达,以柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA为模板,PCR扩增EtSTK基因,将扩展产物与真核表达质粒pcDNA3.1-flag连接,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-flag-EtSTK,测序鉴定正确后,转染DF-1细胞进行表达,利用Western blot和间接免疫荧光(indirect immunofluorescene assay,IFA)对其表达情况进行鉴定.结果表明重组质粒pcDNA3.1-flag-tSTK构建成功.Western blot显示在54 kDa处出现条带;IFA检测到特异性的绿色荧光,表明构建的重组质粒pcDNA3.1-flag-EtSTK成功地在DF-1中实现了表达.本研究结果为深入了解柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的功能及球虫核酸疫苗提供了基础.