柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2真核表达质粒的构建及在细胞中的表达

摘要

为构建柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2(Eimeria tenella silent information regulator 2,EtSIR2)的真核表达质粒,以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA为模板,PCR扩增出EtSIR2基因,PCR产物经酶切回收纯化目的片段后与经相应酶切的真核表达载体pC AGG s连接.连接产物经PCR和酶切鉴定,再经测序鉴定正确后,分别转染DF-1细胞和BHK细胞进行表达,用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtSIR2基因的表达情况.结果表明:成功扩增了EtSIR2基因,长度为909 bp;Western blot可见大小约为37 kDa的表达蛋白条带;间接免疫荧光可以检测到特异性绿色荧光,表明成功构建了EtSIR2的真核表达质粒pCAGGs-EtSIR2,并能在哺乳动物细胞和禽类细胞中表达.该研究结果为深入研究EtSIR2的生物学特性和球虫DNA疫苗的研制打下了基础.