AKT和PKCθ与吗啡抑制辅助性T淋巴细胞分化的关系

摘要

目的评价蛋白激酶B（AKT）和蛋白激酶Cθ（PKCθ）与吗啡抑制辅助性T淋巴细胞（Th细胞）分化的关系。方法取20名健康成年志愿者静脉血样各20 ml,采用密度梯度离心法提取外周血单个核细胞（PBMC）,采用免疫磁珠分离法提取纯CD4+T淋巴细胞。采用随机数字表法,将CD4+T淋巴细胞分为4组（n=3）:对照组（C组）不给予任何处理;PI组加入佛波酯（PMA）25 ng/ml+钙离子载体（Ion）1μg/ml;吗啡组（M组）加入PMA 25 ng/ml+Ion 1μg/ml+吗啡50 ng/ml;纳洛酮组（N组）加入PMA 25 ng/ml+lon1μg/ml+吗啡50 ng/ml+纳洛酮50 ng/ml。细胞置于37℃5%CO2细胞堵养箱中孵育4 h。采用流式细胞分析法测定IFN-γ和IL-4的表达,以IFN-γ表达反映Th1细胞亚群比例,以IL-4表达反映Th2细胞亚群比例,计算Th1/Th2比值。采用Western blot法检测AKT、磷酸化AKT（pAKT）、PKCθ和磷酸化PKCθ（p-PKCθ）的表达,计算p-AKT/AKT比值和p-PKCθ/PKCθ比值,分别反映AKT和PKCθ的活性。结果与C组比较,PI组、M组和N组Th1、Th2细胞亚群比例、Th1/Th2比值升高,PI组和N组AKT和PKCθ的活性升高,M组PKCθ活性升高（P＜0.05）。与PI组比较,M组Th1细胞亚群比例、Th1/Th2比值和AKT活性降低,N组Th1/Th2比值降低（P＜0.05）,M组和N组PKCθ活性差异无统计学意义（P＞0.05）。与M组比较,N组Th1细胞亚群比例、Th1/Th2比值和AKT活性升高（P＜0.05）,PKCθ活性差异无统计学意义（P＞0.05）。结论吗啡通过激活阿片受体抑制Th细胞分化的机制与抑制AKT的激活有关,与PKCθ无关。