养精胶囊通过PI3K-Akt-Cyclin D1通路促进小鼠精原干细胞的增殖

摘要

目的 研究养精胶囊促进小鼠精原干细胞(SSCs)增殖的分子机制.方法 提取4～6 d雄性BALB/c小鼠睾丸中的SSCs,纯化并传代获得稳定的细胞.将不同浓度的养精胶囊水提物加入SSCs中,CCK-8检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,qRT-PCR以及Western blot检测Cyclin D各个亚型的表达.之后进行阻断实验,在加入养精胶囊前预先加入siRNA-Cyclin D1或者LY294002(PI3K阻断剂),同样的方法检测细胞的增殖活性和细胞周期,以及p-Akt/Akt、Cyclin D1的表达情况.结果 0.01、0.1、1 mg/mL浓度的养精胶囊在24、36、48 h这三个时间点可以促进SSCs的增殖,1 mg/mL养精胶囊作用细胞48 h后,S期细胞比例升高22.7％,有统计学差异.1 mg/mL养精胶囊可以促进Cyclin D1的表达,而对Cyclin D2、Cyclin D3的表达无影响.阻断实验表明,预先加入siRNA-Cyclin D1或者LY294002可以阻断PI3K-Akt-Cyclin D1通路,降低SSCs的增殖活性,减少S期细胞比例,抑制p-Akt/Akt、Cyclin Dl的表达.结论 补肾填精中药养精胶囊可以通过PI3K-Akt通路作用于CyclinD1,提高S期细胞比例,促进SSCs增殖.