密码子优化的牛精蛋白基因在大肠杆菌中的表达

摘要

以PCR的方法得到牛精蛋白基因组基因,去其内含子,得到牛精蛋白cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-2T中,组装成表达载体pGEX-2T-PE.利用大肠杆菌偏好的编码精氨酸的密码子CGT将野生型牛精蛋白基因中编码精氨酸的稀有密码子( AGA或AGG)替换掉,通过基因合成得到密码子优化的牛精蛋白基因,将其克隆入原核表达载体pGEX-2T,组装成表达载体pGEX-2T-PS.将这两个表达载体分别转化入大肠杆菌表达菌株BL21中,经IPTG诱导,同样条件下,野生型牛精蛋白基因无法得到表达,密码子优化的牛精蛋白基因能够得到良好的表达,表达产物约占细菌总蛋白的18%.将表达蛋白纯化,进行DNA-蛋白结合实验,发现其能与DNA发生非特异性的结合.