乳酸对非小细胞肺癌细胞线粒体自噬的影响

摘要

目的本研究旨在探讨乳酸对人非小细胞肺癌细胞线粒体自噬的影响。方法将人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)和非小细胞肺癌细胞(A549)分别给予常氧(21%O_(2))和低氧(1%O_(2))处理,测定细胞在常氧和低氧条件下的乳酸生成情况;用外源乳酸(0、5、10mM)在常氧和低氧条件下分别处理BEAS-2B和A549细胞,应用qPCR法分析线粒体DNA拷贝数,用蛋白免疫印迹法检测LC3B、TOM20、HSP60蛋白水平;使用Mitotracker■Red(581/644nm)、Lyso View Blue法检测线粒体及溶酶体共定位情况。结果与常氧组相比,低氧组BEAS-2B和A549的乳酸生成量明显升高(P<0.05)。未用乳酸干预时,相比于常氧组,低氧组A549线粒体拷贝数明显增加(P<0.0001),BEAS-2B线粒体拷贝数明显减少(P<0.0001);用乳酸干预后,常氧组和低氧组A549线粒体拷贝数随乳酸浓度增加而减少,BEAS-2B线粒体拷贝数变化则呈相反趋势。与对照组相比,常氧组和低氧组经乳酸干预后,BEAS-2B、A549细胞中的LC3B-Ⅱ/Ⅰ比值增加,A549细胞中的HSP60、TOM20蛋白表达水平下降,而BEAS-2B细胞中的HSP60、TOM20蛋白表达水平无明显改变;在常氧和低氧条件下与对照组相比,Lac-10mM组A549细胞线粒体和溶酶体荧光共定位增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乳酸可以增强非小细胞肺癌细胞线粒体自噬功能。