FTC-CD133纳米微粒抑制肝癌干细胞耐药性的研究

摘要

目的 制备包裹乳腺癌耐药蛋白(BCRP/ABCG2)多药转运体的特异抑制剂FTC且连接CD133抗体的纳米微粒,并评价其特性和治疗作用.方法 运用复乳蒸发法制备以聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)为载体的包封订C的载药纳米微粒,通过碳化二亚胺法在其表面连接CD133抗体,得到纳米微粒FTC-PLGA-NP-C;分析制备得到的纳米微粒的粒径分布、FTC包封率、载药量和纳米微粒的抗体连接效率;CD133+免疫磁珠法分选出CD133+ SP细胞,MTT法检测CD133+ SP细胞的增殖能力,Western blotting检测SP细胞中ABCG2的表达;荧光显微镜下观察FTC-PLGA-NP-C与CD133+SP细胞的结合效率;将CD133+ SP细胞加入不同浓度的FTC-PLGA-NP-C纳米微粒,Western blotting检测其ABCG2的表达;以同体积PBS为对照,在CD133+ SP细胞中加入FTC-PLGA-NP-C纳米微粒,同时加入阿霉素,HPLC检测孵育不同时间后细胞内阿霉素的浓度.裸鼠腋下荷瘤,成瘤后尾静脉注射FTC-PLGA-NP-C或者0.9％氯化钠溶液,48 h后再由尾静脉注射阿霉素,测量瘤体直径,并采用高效液相色谱法检测裸鼠肿瘤组织中阿霉素的浓度.结果 FTC-PLGA-NP-C呈规则球形,粒径分布为60 ～ 120 nm,载药量为11.27％,包封率为37.18％,与CD133 SP细胞有较好的结合能力;Western blotting检测显示ABCG2在CD133+ SP细胞中表达,且随着FTC-PLGA-NP-C纳米微粒剂量的增加,ABCG2的表达量逐渐降低,到4 mg/ml FTC-PLGA-NP-C时已几乎检测不到ABCG2的表达.从24 h开始,PBS中CD133 SP细胞内阿霉素浓度很快下降至1 μg/ml及以下;而FTC-PLGA-NP-C中CD133+ SP细胞内阿霉素浓度一直维持在2～3 μg/ml.生理盐水组小鼠瘤体直径为(1.845-±0.076) cm,高于FTC-PLGA-NP-C组的(1.238±0.072) cm (t=5.802,P＜0.001);生理盐水组瘤内阿霉素浓度为(2 005±0.154) μg/ml,低于FTC-PLGA-NP-C组的(3.853±0.261) μg/ml(t=6.088,P＜0.001).结论 制备的载药纳米微粒FTC-PLGA-NP-C可较好地靶向肝癌干细胞,并抑制其耐药蛋白ABCG2的表达,降低肿瘤细胞对常规治疗药物的耐药性,提高化疗药物的治疗效果.