人精原干细胞的体外培养及其功能鉴定

摘要

目的：通过应用多种培养条件下的生殖细胞共培养体系，寻求人精原干细胞（SSC）长期体外生存和扩增的优化途径。方法：应用磁式分选所获得的α6＋Thy-1＋c-kjt-细胞，分别以STO、MEF、Sertoli细胞为饲养层，于DMEM／F12、DMEM或DMEM-SF培养液条件下短期培养，然后选择胎儿Sertoli细胞作为共培养体系，在32℃、5％CO，、DMEM／F12（含10％胎牛血清）培养条件下，分别观察成人和胎儿生殖细胞的长期培养结果。并应用免疫组化技术和SSC移植技术对培养细胞进行初步生物学特性和功能鉴定。结果：在短期培养中，仪α6＋Thy-1＋c-kjt-细胞在存在饲养层时，可在DMEM和DMEM／F12培养液中稳定生存，1周内存活率可达909，6。长期培养条件下，α6＋Thy-1＋c-kjt-细胞逐渐与Sertoli细胞形成紧密的贴附或镶嵌关系，呈单个、成对、短链状或小团簇状；胎儿SSC与成人类似，部分以圆球形散在分布于Sertoli细胞表面，并常可观察到明显的成对或短链状细胞，部分呈有突起的长梭形扁平细胞，与Sertoli细胞相互形成紧密连接；