甜瓜响应甜瓜坏死斑点病毒侵染的cDNA文库构建

摘要

为解析甜瓜坏死斑点病毒(melon necrotic spot virus,MNSV)与寄主甜瓜的互作,筛选病毒编码的蛋白与寄主的互作因子,构建了MNSV侵染的甜瓜cDNA文库.在甜瓜品种白玫子叶期接种MNSV,待植株表现典型的系统坏死斑点症状后,收集症状明显的整株甜瓜幼苗,采用SMART(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)技术合成cDNA,利用DSN(duplex-specific nuclease)对cDNA均一化处理后,首次构建了MNSV侵染甜瓜的cDNA文库并评价了文库的质量,文库容量为4.5×106 cfu,文库滴度为3.6×107 cfu·mL-1,文库克隆重组率为100％,文库插入片段大小在500～2000 bp之间,说明文库质量很好.该文库的构建为解析MNSV与寄主互作及甜瓜响应MNSV的致病机制奠定了基础.