基质金属蛋白酶组织抑制剂-3对喉癌细胞顺铂化疗敏感性提高的机制研究

摘要

目的 探讨基质金属蛋白酶组织抑制剂-3(TIMP-3)提高喉癌Hep-2细胞顺铂化疗敏感性的作用机制.方法 试验分为空白对照组(A组)、顺铂组(B组)和顺铂+TIMP-3组(C组),A组和B组均为10 mL Hep-2细胞液溶于10％胎牛血清中,分别加入0和5μmol/L顺铂5 mL,C组为10 mL转染TIMP-3的Hep-2细胞液加入顺铂(5μmol/L)5 mL,置CO2培养箱中,于37℃、5％CO2、20％O2条件下培养72 h.以噻唑蓝(MTT)比色法检测Hep-2细胞活力及细胞单克隆形成数目,以流式细胞仪检测Hep-2细胞凋亡情况,以荧光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(MMP)水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测TIMP-3 mRNA表达水平,以酶联免疫吸附法检测细胞色素酶C、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达水平.结果 与A组比较,B组和C组细胞活力、存活率水平、细胞单克隆形成数目、MMP均显著降低,细胞凋亡率、TIMP-3 mRNA和细胞色素酶C、Cas-pase-3、Caspase-9蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);C组上述指标均优于B组(P<0.01);TIMP-3与细胞色素酶C、Caspase-3、Caspase-9呈显著正相关(P<0.01).结论 TIMP-3能提高喉癌Hep-2细胞顺铂化疗敏感性,其机制与上调TIMP-3,促进MMP去极化和线粒体细胞色素C释放,进而诱导Caspase-3和Caspase-9过表达引起细胞凋亡有关.