pSiRNA-D114逆转录病毒载体的构建及对骨肉瘤UMR106细胞D114蛋白表达的作用

摘要

目的 建立逆转录病毒介导的人D114基因RNA干扰体外表达体系并观察对骨肉瘤UMRl06细胞的作用.方法 将人Dil4基因RNAi双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒psilencer 5.1-H1 R.etro中,构建成携带人D114基因RNAi逆转录病毒载体pSiP,NA-D114,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染骨肉瘤细胞UMR106.用Westem blot分别检测对转染细胞人D114蛋白表达的影响.结果 重组pSiR.-NA-D114质粒经测序鉴定正确.重组逆转录病毒滴度可达221×104cfu/mL,感染UMR106骨肉瘤细胞3 d能明显抑制细胞Dll4蛋白表达,其表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组.结论 成功构建了沉默D114表达的载体pSiRNA-D114,并且该载体能有效地敲低骨肉瘤细胞D114基因表达.