黄淮山羊Leptin cDNA的克隆及鉴定

摘要

根据GenBank中公布的山羊Leptin基因部分基因组核苷酸序列,设计合成一对引物,以山羊脂肪组织总RNA为模板,采用RT-PCR法,扩增出Leptin成熟蛋白编码cDNA序列,将此扩增产物克隆入pMD18-T载体,进行PCR、双酶切鉴定及序列测定与分析.结果表明,扩增的山羊Leptin基因编码序列长为441 bp,编码146个氨基酸.同源性分析表明,山羊Leptin基因成熟蛋白编码cDNA与小鼠、人、猪、牛及绵羊基因相应序列的同源性分别为82.22%、87.76%、92.97%、96.15%和98.64%,氨基酸同源性为84.25%、86.99%、92.47%、97.95%和100.00%,说明Leptin是一组在进化上高度保守的蛋白质.山羊Leptin成熟蛋白cDNA的成功克隆,为进一步研究黄淮山羊Leptin基因全结构、基因表达与调控奠定了基础.