衍生化-液相色谱-串联质谱法同时测定益生菌发酵液中3种短链脂肪酸和乳酸含量

摘要

建立一种结合柱前衍生技术液相色谱-三重四级杆质谱联用同时测定益生菌发酵液中乙酸、丙酸、丁酸和乳酸含量的方法。在吡啶作为催化试剂和碳二亚胺盐酸盐做偶联试剂条件下,目标物与3-硝基苯肼缩合反应生成3-硝基苯腙,优化确定衍生反应的温度、时间以及试剂用量;采用BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)液相色谱柱,以甲酸水-甲醇异丙醇为流动相,5 min内较好的分离了3种短链脂肪酸和乳酸;采用ESI离子源,多反应监测负离子模式采集质谱信号,以丁酸-D7为内标进行定量。最佳反应条件为30 mmol/L EDC作为偶联试剂和50 mmol/L 3-NPH·HCl作为衍生试剂,40℃反应30 min;4种目标物在各自的浓度线性范围内线性关系良好(R^(2)>0.999),方法检出限为0.5~2 mg/kg,加标回收率在81.8%~105.3%之间,重复性测试相对标准偏差1.3%~5.1%。该方法灵敏度高,结果可靠,操作简便,适用于各类益生菌发酵液中3种短链脂肪酸和乳酸的同时快速测定。