一种高效液相色谱-串联质谱法测定维生素D制剂中维生素D3含量的方法

摘要

本发明提供了一种高效液相色谱‑串联质谱法测定维生素D制剂中维生素D3含量的方法，包括以下步骤：取制剂内容物用正己烷稀释至合适浓度，进行LC‑QQQ液质联用检测：采用Agilent Zorbax Rx‑Sil色谱柱，流动相为正己烷：正戊醇＝997:3，流速1mL·min‑1，柱温35℃，APCI源，MRM模式，m/z385.3‑>259.1(+)(定量离子)，流路0‑5min切废液，5min后进质谱，外标法定量。经方法学验证，本方法适用于油溶性维生素D制剂中的维生素D3含量测定，无需任何前处理步骤，无需测定前维生素D3的相对校正因子，操作简便、快速准确，为油溶性维生素D3制剂的含量检测提供参考。

说明书

技术领域

本发明属于维生素测定技术领域，具体涉及一种高效液相色谱-串联质谱法测定维生素 D制剂中维生素D

背景技术

维生素D

[1]中国药典2020年版.四部[S].通则0722维生素D测定法：105-106。

[2]张艳海，张大伟，曹莹等.在线二维反相色谱法快速测定维生素AD制剂中维生素A、 D的含量[J].分析测试学报，2016,35(1):28-34。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种高效液相色谱-串联质谱法测定维生素D制剂中维生素D

为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

一种高效液相色谱-串联质谱法测定维生素D制剂中维生素D

优选，所述的色谱条件为：色谱柱Agilent Zorbax Rx-Sil，3.0×100mm,1.8μm，流动相为正己烷：正戊醇体积比＝997:3，流速1mL·min

优选，所述的质谱条件为：APCI源，干燥气温度350℃，干燥气流5mL·min

进一步的，所述的采用外标法对维生素D

进一步的，所述的维生素D制剂为维生素D油溶性制剂。

优选的，所述的维生素D油溶性制剂包括油溶性的维生素D滴剂/软胶囊，或油溶性的维生素AD滴剂/软胶囊等。

与现有技术相比，本发明的优势在于：

本发明提供的一种高效液相色谱-串联质谱法测定维生素D制剂中维生素D

附图说明

图1为系统适应性溶液的HPLC色谱图(254nm)。

图2为HPLC-MRM谱图(m/z 385.3->259.1，A.系统适应性溶液；B.维生素D

图3为维生素AD滴剂(软胶囊型)-A厂家样品溶液的DAD等吸收图(扫描波长200-400 nm；1.维生素A醋酸酯顺式异构体；2.维生素A醋酸酯；3.植物油)。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1

1、仪器与试药

液质联用仪1290-6470(QQQ)(Agilent)；UV-8两用紫外仪(无锡科达仪器厂)；Climdcell 恒温恒湿培养箱(上海苏达实验仪器有限公司)；水为超纯水；正己烷、异辛烷、正戊醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。维生素D

2、方法与结果

2.1试液的制备

对照品贮备液(I)：精密称取维生素D

对照品贮备液(II)：精密量取5mL对照品储备液(I)，置于50mL棕色量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，充氮密塞，避光，0℃以下保存。浓度为25μg·mL

对照品贮备液(III)：精密量取5mL对照品储备液(II)，置于50mL棕色量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，充氮密塞，避光，0℃以下保存。浓度为2.5μg·mL

对照品溶液：精密量取4mL对照品储备液(III)，置于50mL棕色量瓶中，用正己烷稀释至刻度。浓度为0.2μg·mL

供试品溶液：精密称定装量差异项下的内容物样品适量于棕色量瓶，加入少许正己烷溶解并稀释到刻度，摇匀，配置成含维生素D

系统适应性溶液：量取对照品储备液(I)5mL，置于具塞玻璃容器中，通氮密塞，置于 90℃水浴中加热1h，取出，迅速冷却，加正己烷5mL，摇匀，置于1cm具塞石英吸收池中，在主波长254nm和365nm的紫外灯下，将石英吸收池斜放成45°，并距灯管5-6cm，照射5min。进行质谱检测，需稀释100倍后进样。

f

f

2.2检测条件的建立

2.2.1色谱条件

参考中

[1]中国药典2020年版.四部[S].通则0722维生素D测定法:105-106。

[3]美国药典36版-NF31[S].维生素D

[4]英国药典2013版.一部及二部[S]维生素D

[5]日本药典2016版XVI[S]维生素D

2.2.2质谱条件

APCI源，干燥气温度350℃，干燥气流5mL·min

2.3前维生素D

前维生素D

参考中国药典(2020版)通则0722维生素D测定法中f

表1不同时刻测得的f

注：A

计算前维生素D

2.4方法学验证

2.4.1精密度试验

精密量取10μL对照品溶液，连续重复进样6次，记录维生素D

2.4.2线性试验

分别精密量取维生素D

2.4.3回收率试验

对照品溶液的配制：精密称定维生素D

样品溶液的配制：精密称定制剂内容物适量，配制成含有维生素D

样品加标溶液的配制：精密称定维生素D

按照含量测方法测定上述三种溶液，对前维生素D

表2不同制剂中总维生素D

2.4.4稳定性试验

对照品溶液的配制：精密量取200μL对照品储备液(II)，置于25mL棕色量瓶中，用正己烷定容到刻度，配制成0.2μg·mL

样品溶液的配制：精密称定维生素D

由于正己烷在常温下极易挥发，因此实验中尝试了进样器温控16℃和室温下上述两种溶液交替进样，考察对照品溶液和样品溶液维生素D

2.4.5检测限与定量限

实验发现，不同批次配制的流动相导致保留时间(Rt)略有不同(12.0～12.8)时，峰面积及信噪比会有非常明显的变化，保留时间越小，峰面积越高，信噪比越高。这一现象与紫外检测器不同，这可能是由于流动相中正戊醇的导电能力明显高于正己烷，二者比例细微的变化也会影响维生素D

2.5含量测定

用上述LC-QQQ(MRM)测定法对维生素D滴剂(A厂-12951006/12962014/12963008)、Fultium-D

表3含量测定结果

注：*近效期(距有效期限6个月内)，**过效期(均以实际测定时间为参照)。

从表3可以看出，维生素D滴剂、维生素AD滴剂中总D

2.6离子源参数的优化

维生素D

2.7无前处理步骤的可行性

由于本实验没有任何的前处理步骤，样品适当稀释后直接进行检测，因此需要考察制剂中的其他辅料(尤其是植物油)是否会干扰维生素D

2.8f

由于中国药典维生素D测定法采用的紫外检测器，前维生素D

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。