乳铁蛋白胃蛋白酶水解物分离纯化抗菌肽的研究

摘要

文章以乳铁蛋白胃蛋白酶水解液为原料,依次用DA201型大孔吸附树脂、Sephadex G-25、Sephadex G-15凝胶树脂对乳铁蛋白抗菌肽进行分离纯化。结果表明,乳铁蛋白酶解原液抗菌活性为MIC _(E.coli)=0.5 mg/mL和MIC_( S.aureus)=0.5 mg/mL;通过大孔吸附树脂的静态吸附、解吸实验,确定分离条件:以85%乙醇溶液为洗脱剂,上样浓度为30 mg/mL,上样流速为2 mL/min,洗脱流速为1 mL/min,分离组分的抑菌活性为MIC _(E.coli)=0.25 mg/mL和MIC _(S.aureus)=0.25 mg/mL。Sephadex G-25凝胶柱分离条件:以去离子水为洗脱剂,洗脱速度为0.25 mL/min,上样浓度为20 mg/mL,上样体积为1 mL,纯化后得到3个主峰,其中组分b的抑菌活性相对较强,MIC _(E.coli)=0.125 mg/mL,MIC _(S.aureus)=0.125 mg/mL。组分b再经Sephadex G-15凝胶过滤色谱分离出2个峰,其中组分b-1具有较强抑菌活性,MIC _(E.coli)=0.125 mg/mL,MIC _(S.aureus)=0.0625 mg/mL。经分离纯化后的乳铁蛋白抗菌肽对E.coli的抗菌活性提高4倍,对S.aureus的抗菌活性提高8倍。