犊牛口腔黏膜上皮细胞T7噬菌体展示文库的构建

摘要

试验旨在筛选水泡性口炎病毒的受体,构建犊牛口腔黏膜上皮细胞T7噬菌体展示文库.通过用Trizol试剂提取犊牛口腔黏膜上皮细胞总RNA,然后分离和纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA.在双链cDNA末端加上定向EcoR Ⅰ/HindⅢ接头,然后用EcoR Ⅰ和HindⅢ酶消化双链cDNA末端接头,使双链cDNA 2端含有EcoR Ⅰ和HindⅢ黏性末端.所有处理后的双链cDNA,经Mini Column纯化,收集400 bp以上的双链cDNA片段,将其连接带有EcoR Ⅰ和HindⅢ末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示文库.经测定未扩增文库的滴度为1.3×10 7PFU/mL,重组率为95.8％,扩增后文库滴度为2.6×1010 PFU/mL.随机挑取100个噬菌斑进行PCR鉴定,95％的插入片段大于400 bp.结果表明成功构建了犊牛口腔黏膜上皮细胞T7噬菌体展示文库.