鲟鱼软骨酶解条件优化及酶解物的体外抗肿瘤活性

摘要

为改善鲟鱼骨胶原的营养价值和生理功能,提高骨胶原多肽得率,提升水产品的附加值,采用碱性蛋白酶和中性蛋白酶复合酶解技术,以肽得率为指标,通过单因素试验、正交设计试验优化骨胶原多肽的酶解条件。采用CCK-8法测定鲟鱼骨胶原多肽对人源结直肠癌细胞Caco-2、乳腺癌细胞MCF-7、肝癌细胞HeGp2、肺癌细胞A549及宫颈癌细胞HeLa 5株癌细胞增殖的抑制能力,并选取抑制效果明显的肺癌细胞A549为模型,进一步检测鲟鱼骨胶原多肽作用后对其caspase-1、caspase-3以及细胞膜电位的影响。结果表明:1)鲟鱼软骨胶原肽的酶解工艺条件为:加酶量1.5×10~5 IU/g,骨粉与水质量比1∶25,酶解时间5 h,酶解温度50℃,碱性蛋白酶与中性蛋白酶酶活力比1∶2。该条件下骨胶原蛋白肽得率为(72.36±2.33)%;2)抑癌活性测定结果显示,鲟鱼骨胶原多肽通过激活凋亡蛋白酶caspase-1,使细胞线粒体膜电位发生改变,膜电位降低,诱导caspase-3酶活力增加,酶活力可达149.9 IU/μg,进而促进细胞凋亡的发生,抑制细胞的增殖。鲟鱼骨胶原多肽具有抑制癌细胞增殖的能力,有潜在的开发应用前景。