猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

摘要

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白(rN蛋白)为抗原,初步建立了检测PRRSV抗体的rN-ELISA方法.根据GenBank公布的PRRSV VR2332株编码核表壳蛋白的ORF7基因序列设计合成了一对引物,成功扩增出ORF7基因.将其克隆到PET-30a构成原核表达裁体,转化宿主菌BL21(DE3)并获得表达.通过SDS-PAGE和Western blot检测证实rN蛋白获得了高效表达,且具有良好的免疫学活性.以纯化的重组蛋白为抗原建立检测PRRSV抗体的间接ELISA法.试验证明,该方法与IDEXX公司生产的PRRSV抗体检测ELISA试剂盒对同批临床血清样本的检测结果完全相符,且对其他常见的6种猪疫病阳性血清检测均为阴性,无交叉反应.本研究建立的rN-ELISA方法敏感性高、特异性强,可用于猪繁殖与呼吸综合征常规诊断及流行病学的调查研究.