辅酶NADH与色氨酸共振能量转移的荧光动力学研究

摘要

采用时间相关单光子计数技术,结合紫外-可见吸收光谱和稳态荧光光谱,对不同环境下的色氨酸和辅酶还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)之间的共振能量转移荧光动力学进行了研究.单体色氨酸、牛血清白蛋白以及乳酸脱氢酶蛋白与NADH之间相互作用的光谱数据表明,只有存在NADH结合位点的乳酸脱氢酶和NADH之间发生了荧光共振能量转移.进一步通过加入丙酮酸来阻断乳酸脱氢酶和NADH之间的荧光共振能量转移通道,时间分辨荧光光谱和衰减相关光谱(DAS)证实,蛋白结合位点的存在是NADH和色氨酸之间发生荧光共振能量转移的前提条件.DAS揭示了乳酸脱氢酶平均荧光寿命的减小主要是源于色氨酸中7.35 ns的荧光寿命成分与NADH之间的荧光共振能量转移,同时给出了NADH和色氨酸之间的能量转移效率,为研究NADH和蛋白之间的相互作用提供了新思路.