以蛋白中色氨酸残基为Forster共振能量转移供体的均相亲和分析方法

摘要

本发明以蛋白质中色氨酸残基为内在Forster共振能量转移供体并设计特异性分析探针为Forster共振能量转移接受体，从而建立均相荧光亲和分析方法；所用分析探针带萘胺类荧光团，可检测探针与蛋白复合物中色氨酸残基在340nm附近荧光经共振能量转移被猝灭下降或探针经共振能量转移激发而使探针特有荧光升高；测定经过共振能量转移激发产生的探针特有荧光可高灵敏度非竞争性测定蛋白含量；通过候选配体竞争结合，测定共振能量转移产生的探针特有荧光或蛋白自身340nm荧光的变化，可测定非荧光候选配体竞争结合的半有效浓度，考虑分析探针与靶蛋白浓度相当的情况可推算候选配体的解离常数；当分析探针的亲和力比待测配体的亲和力低得多时，通过竞争结合还可以测定高亲和力配体的含量；此技术可用于实验诊断和配体类药物筛选。