慢病毒介导的RNA干扰技术构建hOGG1和hMTH1基因缺陷细胞模型

摘要

目的:分别建立8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1(human 8-hydroxyguanine glycosylase,hOGG1)基因和8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶(human Mut T homlogue,hMTH1)基因缺陷细胞模型,为进一步研究两个基因的相互关系提供理想的研究平台。方法:利用慢病毒载体介导的小发夹状RNA(small hairpin RNA,shRNA)转入人胚胎肾细胞(293FT)包装慢病毒,用所得到的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞(HFL),杀稻瘟菌素筛选稳定表达的细胞株,荧光显微镜下观察慢病毒的包装效率和感染效率,Real-time RT-PCR鉴定基因干扰效果。结果:得到了滴度较高的慢病毒,感染靶细胞后得到hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型,hOGG1 mRNA和hMTH1mRNA表达水平分别比正常HFL细胞下降了90%和60%。结论:通过慢病毒包装技术,成功构建hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型。