腺病毒介导的DDEFL1 RNA干扰显著抑制了人肝癌HepG2和肺癌H1299细胞的迁移能力

摘要

目的：通过腺病毒介导RNA干扰抑制肝HepG2和肺H1299细胞的DDEFLI，研究了DDEFLl的表达抑制对这两种癌细胞的生长与凋亡以及细胞迁移能力的影响。方法:构建携带DDEFL1-shRNA的重组腺病毒Ad1、Ad2、Ad3和携带一段随机序列的阴性对照腺病毒Ad4.重组腺病毒感染细胞后，利用半定量RT-PCR和Western印迹分别进行DDEFLl mRNA和蛋白表达水平检测。利用划痕损伤实验检测细胞迁移能力。首先将足量细胞接种于六孔板中，以400 VP/cell加入适量腺病毒储液。感染腺病毒24小时后用小枪头在细胞表面划线，保温培养12 h.18 h,24h后分别随机选定三个位置用倒置显微镜对细胞进行拍照。腺病毒感染48h后收集细胞样品，利用MTT和流式细胞仪分别检测细胞生长凋亡及细胞周期分布。结论:腺病毒介导的DDEFLl RNA干扰显著抑制了HepG2和H1299细胞的细胞迁移能力，但对细胞增殖、细胞周期分布和细胞形态无明显影响。