摘要
前言
第一章 构建携带E1A基因与RNA干扰序列的表达框
1.1 材料和主要试剂
1.1.1 细胞株、菌种和载体
1.1.2 主要试剂
1.2 方法
1.2.1 Survivin启动子的克隆
1.2.2 E1A基因的克隆
1.2.3 RNA干扰序列的构建
1.2.4 表达框的酶切位点分析
1.2.5 构建Survivin启动子-RNAi-SV40终止子表达框
1.2.6 构建Survivin promoter-E1A-RNAi-SV40终止子表达框
1.2.7 统计学处理
1.3 结果
1.3.1 Survivin启动子的克隆
1.3.2 E1A基因的克隆
1.3.3 表达框的酶切位点分析结果
1.3.4 构建Survivin启动子-RNAi-SV40终止子表达框
1.3.5 构建Survivin启动子-E1A基因-RNAi-SV40终止子表达框
1.4 讨论
1.5 结论
第二章 携带RNA干扰序列的溶瘤腺病毒的构建
2.1 材料和主要试剂
2.1.1 细胞株、菌种和载体
2.1.2 主要试剂
2.2 方法
2.2.1 构建重组腺病毒载体
2.2.2 包装重组腺病毒
2.2.3 重组腺病毒的PCR鉴定
2.2.4 测定重组腺病毒滴度
2.2.5 确定对肝癌细胞HepG2和HuH7的最佳感染复数(MOI)
2.2.6 统计学处理
2.3 结果
2.3.1 构建重组腺病毒载体
2.3.2 重组腺病毒的PCR鉴定
2.3.3 重组腺病毒滴度的测定
2.3.4 最佳感染复数的确定
2.4 讨论
2.5 结论
第三章 重组溶瘤腺病毒的靶向抑制作用研究
3.1 材料和主要试剂
3.1.1 细胞株、菌种和载体
3.1.2 主要试剂
3.2 方法
3.2.1 RT-PCR法测定感染前后相关基因的mRNA表达水平
3.2.2 Real time PCR验证RT-PCR结果
3.2.3 Western Blot法对相应蛋白进行检测
3.2.4 统计学处理
3.3 结果
3.3.1 RT-PCR法测定感染前后相关基因的mRNA表达水平
3.3.2 Real time PCR验证结果
3.3.3Western Blot法对相应蛋白进行检溯的结果
3.4 讨论
3.5 结论
第四章 重组溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用研究
4.1 材料和主要试剂
4.1.1 细胞株、菌种和载体
4.1.2 主要试剂
4.2 方法
4.2.1 光镜下观察肝癌细胞形态的变化
4.2.2 重组溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用研究
4.2.3 统计学处理
4.3 结果
4.3.1 光镜下观察肝癌细胞形态的变化
4.3.2 重组溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用研究结果
4.4 讨论
4.5 结论
全文总结
附录:
参考文献
缩写词简表
致谢
博士研究生期间发表论文情况
声明
统计学审稿证明