适合流式细胞仪分析的大豆细胞核解离液的筛选与应用

摘要

利用大豆Williams 82等多个品种为材料,比较6种不同细胞核解离液的核分离效果,以期制备适合流式细胞仪分析的大豆不同组织部位的高纯度细胞核悬液,并检测其在大豆细胞周期调控中的应用.将新鲜幼嫩的大豆叶和根组织在不同的细胞核解离液中进行机械切割后,细胞核从组织释放游离到核解离液,过400目滤网,离心富集及DAPI染色,流式细胞仪检测分析细胞核解离液中生物颗粒特性和DNA含量.结果 表明:Galbraith's和LB01核解离液适用于大豆叶和根中细胞核的解离,其变异系数CV值较低,分别是2.78％和2.96％.其中LB01核解离液可检测到显著的G2/M期峰,在细胞周期及遗传倍性的研究中应用相对更好,且核解离液在不同大豆品种上具有一定的适用性,可成功检测PEG模拟的干旱胁迫对不同大豆根尖细胞周期的调控.