滇牡丹种子实时荧光定量PCR分析中内参基因的筛选与验证

摘要

通过实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)分析滇牡丹(Paeonia delavayi)不同发育时期的种子中内参基因的表达稳定性,筛选出滇牡丹种子成熟过程中最稳定的内参基因.利用实时荧光定量PCR技术,分析8个传统内参基因GAPC、PEPC、CYC、ACT、EF2α、TUB、ACP1和RPL1在滇牡丹种子不同发育时期的表达差异情况,利用3个分析软件GeNorm、Norm Finder和BestKeeper分别评价上述内参基因在滇牡丹不同发育阶段的种子中的表达稳定性.荧光定量及软件分析结果显示,8个内参基因的稳定性各异,表达最为稳定的内参基因是CYC和EF2α,表达最不稳定的内参基因是ACT.对滇牡丹油脂代谢合成途径中部分相关基因进行RT-qPCR分析,得到了相同的表达趋势,验证了CYC和EF2α适合作为内参基因.得到了两个最适用于滇牡丹种子的内参基因CYC和EF2α.