猪 δ 冠状病毒(PDCoV)N蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

摘要

旨在表达和纯化猪 δ 冠状病毒(PDCoV)N蛋白并制备该蛋白的多克隆抗体.以RT-PCR扩增PDCoV N基因并与表达载体pET-28a构建重组质粒,转化Transetta(DE3)菌株诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白表达,以纯化的N蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot验证兔抗血清特异性,间接ELISA测定抗血清效价.利用间接免疫荧光试验(IFA)、免疫荧光试验(IF)、流式细胞术(FCM)鉴定其诊断应用价值.重组N蛋白为可溶性表达,大小约为44 kD,制备的兔抗N蛋白抗体效价可达1:204800.IFA与FCM试验证实该抗体能与PDCoV特异性结合,与PEDV及TGEV无交叉反应,IF试验表明该抗体可用于检测小肠组织中的PDCoV.