一种高效快速鉴定酵母转化子的酵母菌落PCR方法

摘要

酵母是一种重要的基因工程宿主菌,但是由于其细胞壁结构复杂牢固,普通的菌落PCR方法的成功率较低.为解决此问题,提供一种快速、简单、高效的酵母菌落PCR方法.该方法先利用溶壁酶溶解酵母细胞壁,然后利用热涨裂解细胞并进行PCR反应.此方法将酵母细胞裂解和PCR在同一个PCR管中完成.试验结果显示此方法能成功扩增目的基因且成功率高.将此方法应用于外源性内切葡聚糖酶(endoglucanase,EG)的酿酒酵母转化子筛选,经与基因组PCR比较,菌落PCR与基因组PCR结果一致.结果证明此方法具有良好的稳定性,适用于酿酒酵母转化子的快速筛选.