单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定

摘要

为深入研究2F5和4E10抗体,构建了特异性识别HIV-1病毒MPER区域的2F5和4E10单链抗体的重组质粒,进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定.利用重叠PCR扩增及基因重组技术,获得2F5-scFv和4E10-scFv基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+)上,获得表达质粒.转入大肠杆菌BL21(DE3)及Rosetta-gami2(DE3) pLysS中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测发现,2F5-scFv和4E10-scFv在两种表达菌中均以包涵体形式存在,重组蛋白分子量分别约为27 kD、29 kD.变性条件下,利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化,经复性后获得可溶性单链抗体.ELISA检测表明,制备的单链抗体与原核和真核表达的MPER抗原都有特异性结合活性.