鉴定来自喂食褐藻多醣之淡水长脚大虾肝胰脏的分离株为益生菌

摘要

本研究于喂食褐藻多醣后的淡水长脚大虾(Macrobrachium rosenbergii)之肝胰脏分离并评估因喂食出现的特定微生物作为益生菌之可行性。实验以30 µg褐藻多醣喂食每尾虾子连续喂食10天期间,喂食第5天的虾子肝胰脏分离到喂食前和对照组虾子都出现的梅奇酵母菌(Metschnikowia bicuspidata)菌株MB58及MB550。毒性测试发现,菌株MB58及MB550分别注射处理虾子后造成的死亡率分别为12%和22%,均低于已知为益生菌的Lactococcus plantarum的致死率87%。将致病菌分别培养于菌株MB550和MB58之胞外液的结果显示,两菌株都可以抑制致病菌Aeromonas hydrophila和A. veronii的生长;但仅MB550能抑制Lactococcus garvieae。连续口服MB58、MB550及混合菌株(MB58 + MB550)后五天,以L. garvieae感染的虾子存活率分别为70.6%、73.4%和100%,然控制组虾子全数死亡。免疫相关之原酚氧化酵素(prophenoloxidase, proPO)活化系统的表现显示,喂食后5天,MB550喂食组和MB58 + MB550混合喂食组的虾子血浆的活化型酚氧化酵素活性(POS)和总酚氧化酵素活性(POT)与对照组均无差异,然两组虾子的血球内POS及POT则高于对照组;MB58喂食组虾子仅血浆POS高于对照组,血浆POT和血球内POS及POT均与对照组无差异。进一步以褐藻酸(alginic acid)作为黏着剂,将菌株MB58及MB550分别包裹入饲料以制作出5种颗粒饲料,分别连续喂食虾子五天后,易感性实验显示,未包裹菌株的对照组虾子的死亡率为47.8%,仅包裹褐藻酸组23.8%,以褐藻酸包裹MB58、MB550及两株混合的三组虾子的死亡率分别为10.3%、12.0%及11.5%,均明显低于对照组。喂食5天和感染后1天和3天分别测定血浆及血球内POT的结果显示,MB58喂食组仅于感染前的血浆POT高于对照组;MB550组于感染前后的血浆和血球内的POT皆明显高于对照组;混合组则于感染前血浆及血球内POT和感染后血浆POT皆高于对照组。综合上述结果推测,单独喂食菌株MB58和MB550可能抑制致病菌生长和增强proPO活化系统,以提升虾子对感染的抗抵力而降低虾子的死亡率。因此,分离自喂食褐藻多醣之虾子的两株梅奇酵母菌MB58和MB550可能具有作为益生菌的潜力以应用于虾类水产养殖。