磁性微球用于蛋白-抑制剂复合物解离常数的快速测定

摘要

以凝血酶与其选择特异性抑制剂阿加曲班为模型,应用磁性微球(MM)建立了一种快速测定蛋白-抑制剂复合物解离常数(Kd)的方法.该方法以四氧化三铁磁性微球为载体,在EDC/NHS偶联作用下制备了凝血酶包覆的磁性微球(Thrombin-MM),考马斯亮蓝G-250蛋白定量法间接测定蛋白键合量为4.1 mg/g,取5 mg Thrombin-MM与400μL一系列不同浓度的阿加曲班溶液混合振荡,应用高效液相色谱法通过测定平衡吸附前后药物浓度,代入Scatchard模型,即得Kd值,与蛋白质数据库中值一致.吸附药物后的Thrombin-MM用含10％甲醇的PBS缓冲液洗脱,回收率约84％,Thrombin-MM可重复利用.