阴道毛滴虫LAG1基因启动子区克隆及分析

摘要

本研究旨在克隆并分析阴道毛滴虫LAG1基因启动子,为进一步研究在细胞衰老过程中LAG1基因的转录调控提供实验资料.预测启动子所在区域,用PCR技术扩增启动子区序列,并分别克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic及增强型绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1,用脂质体介导的方法瞬时转染EC109细胞,然后测定荧光素酶表达活性及观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果表明在构建的6种荧光素酶报告基因表达体系及2种增强型绿色荧光蛋白报告基因表达体系中,表达载体pGL3-455(-455～+55 bp)、pGL3-417(-417～+55 bp)、pGL3-280(-280～+55 bp)、pGL3-202(-202～+55 bp)、pGt3-81(-81～+55 bp)的荧光素酶表达活性相近,均明显高于表达载体pGL347(-47～+55 bp)荧光素酶表达活性,而pGL3-47表达载体荧光素酶表达活性极低,与阴性对照活性相近,提示-47～+55 bp区无启动子活性.绿色荧光蛋白的表达情况也类似,pEGFP-81(-81～+55 bp)有明显的绿色荧光蛋白表达,而pEGFP-47(-47～+55 bp)和空载体pEGFP-1未见表达.因此-81～-47 bp区域含有阴道毛滴虫LAG1基因转录所必需的基本启动子序列.